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蜘蛛：蜘蛛是萤火虫成虫的头号天敌。无论是张网捕捉的蜘蛛，还是爬行于地面猎捕的蜘蛛，都能轻易地将萤火虫捕获。特别是有一种大腹园蛛，在捕捉到雄性萤火虫时，会先吐丝包裹住萤火虫，使其裸露出一截发光器，通过麻醉改变萤火虫的发光频率，发出雌虫的光，进而吸引更多的雄性萤火虫过来，从而捕食更多猎物。
两栖类动物：蛙类、蟾蜍等两栖类动物也会捕食萤火虫的成虫。
昆虫类：螳螂、虫春象等昆虫也会捕食萤火虫。此外，类寄生萤火虫的幼虫和沼蝇会寄生萤火虫的幼虫，对萤火虫种群构成威胁。
水生生物：对于水生萤火虫，长臂虾、吴郭鱼、水虿等水生生物可能会捕食它们。
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