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成年猫头鹰在自然界中天敌较少，但其生存仍面临多种威胁。大型猛禽如金雕、苍鹰等，可能在领地争夺或食物匮乏时攻击中小型猫头鹰，尤其是幼鸟或受伤个体。哺乳动物中，狐狸、狼、猞猁等会攀爬或袭击猫头鹰的巢穴，捕食卵或雏鸟。
人类活动是猫头鹰最大的 “天敌”，栖息地破坏（如森林砍伐、城市化扩张）导致其生存空间萎缩，农药滥用间接毒害猫头鹰（因猎物积累毒素），非法捕猎则用于贸易或标本制作。
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