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猫头鹰的食性因种类和生存环境而异，多数种类会捕食昆虫，同时也会猎食其他小型动物。小型猫头鹰如鸺鹠，主要以甲虫、蛾类、蝗虫等昆虫为食，尤其在繁殖期，昆虫占其食物来源的比例较高，能为幼鸟提供充足蛋白质。
中型和大型猫头鹰如长耳鸮、雕鸮等，虽然以鼠类、野兔、小鸟等为主食，但在昆虫活跃的季节，也会 opportunistically（机会性地）捕食蝼蛄、金龟子等昆虫，作为食物补充。
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