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猫头鹰的猎物种类丰富，主要取决于体型与栖息地，典型猎物包括：
啮齿动物：鼠类（褐家鼠、黑线姬鼠）、鼩鼱等，占其食谱的60%-90%；
鸟类：小型雀形目（麻雀、柳莺）、水鸟（秧鸡、鹭科幼鸟），甚至其他猫头鹰；
爬行与两栖类：蜥蜴、蛇类、蛙类，尤其在热带地区占比更高；
昆虫：大型甲虫、蝗虫、蜈蚣等，部分小型猫头鹰（如鬼鸮）以昆虫为主食；
鱼类：渔鸮属（Ketupa）物种可潜水捕鱼，如黄腿渔鸮能捕捉体重达500克的鱼类。
捕食策略包括：
伏击：在树枝或地面静候猎物靠近；
空中追击：快速俯冲捕捉飞行昆虫或鸟类；
潜水捕食：渔鸮用利爪刺穿鱼体后带回栖息地食用。
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