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猫头鹰的叫声丰富多样，不同种类的叫声存在差异。多数猫头鹰会发出 “咕 —— 咕 ——” 的低沉叫声，声音悠长且穿透力强，尤其是雕鸮，其叫声如远处传来的闷雷，在寂静的夜晚格外清晰，给人神秘、威严之感 。领角鸮的叫声则类似 “王刚哥，王刚哥”，节奏分明，颇具辨识度。
而纵纹腹小鸮的叫声较为尖锐，像是 “嘘嘘” 声或连续的 “叽叽” 声，在求偶或受到威胁时，叫声会变得急促且频繁。这些独特的叫声，不仅是它们交流的方式，还用于宣示领地、吸引配偶或警示同类。
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