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猫头鹰对强光极为敏感，尤其是夜间活动时。其眼睛适应低光照环境，视网膜中视杆细胞密度极高，对强光刺激反应剧烈。实验表明，突然暴露于直射灯光（如汽车远光灯、探照灯）会导致猫头鹰暂时失明，飞行轨迹紊乱，甚至撞向障碍物。这种生理特性与其捕食策略密切相关：夜间依赖微弱月光和星光定位猎物，强光会破坏其视觉定位能力。
此外，猫头鹰的瞳孔在强光下无法有效收缩（因需保持夜视能力），进一步加剧光损伤风险。因此，夜间观察猫头鹰时应避免使用闪光灯或强光照射，建议采用红外线设备或弱光照明。部分栖息地破坏案例显示，人工光源污染（如路灯、建筑照明）会驱离猫头鹰，导致其领地缩小或繁殖率下降。
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