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猫头鹰的叫声活动具有明显的昼夜节律性，主要集中在黄昏至黎明时段。具体发声时间因种类、季节及行为需求而异：短耳鸮等小型猫头鹰常在日落后1至2小时（约19:00-20:00）开始鸣叫，通过低频"咕咕"声标记领地；雕鸮等大型种类则在午夜前后（23:00-1:00）发出穿透力强的"呜咽"声求偶；繁殖期雄性猫头鹰的"鸣唱"行为可持续至凌晨3-4点，频率可达每小时5-8次。
叫声类型与功能密切相关：防御性尖叫多见于受到威胁时，警告性叫声持续时间通常不超过30秒，而求偶鸣唱可能持续整夜。这种时间分布与其夜行性捕食习性高度适配，既避免日间强光干扰，又利用低频声波在夜间环境中实现远距离传播。
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