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大多数猫头鹰属于夜行性动物，主要在夜间活动。它们的眼睛结构特殊，视网膜中含有大量的视杆细胞，对光线十分敏感，即便在昏暗的环境下也能清晰视物，而白天强烈的光线可能会对其视觉造成干扰。
不过，也有少数猫头鹰种类，如短耳鸮、纵纹腹小鸮等，会在白天的清晨或黄昏时分活动，被称为 “crepuscular”（晨昏性）鸟类。总体而言，夜间活动是猫头鹰的主要行为特征，这与其捕食习性相适应，它们在夜间凭借敏锐的听觉和视觉捕捉鼠类、小鸟等猎物。
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