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四眼斑龟幼体时，因性未成熟，性别难以鉴定。一般个体重达300克以上，性已成熟。雄性的头顶部呈深橄榄绿色，眼部为淡橄榄绿色，中央有一黑点，每一对眼斑的周围有一白环包围，每一对眼斑的周围有1白条纹包围，颈的背部有3条黄色粗纵条纹。
颈腹部有数条黄色纵纹，颈基部条纹呈橘红色，前肢及颈腹部有橘红色斑点，雌性的头顶部呈棕色，眼斑为黄色，中央有一黑点，每一对眼斑均前小后大，且周围有灰色暗环包围，颈背部的3条粗纵条纹和颈腹部的数条纹均为黄色，在繁殖期，龟体散发出异样臭味。
四眼斑龟一般在5月初有雄龟追逐雌龟的现象，雄龟绕雌龟打转或在雌龟前面，头对着雌龟，伸长头颈，上下点动或左右摇动，不让雌龟爬动，若雌龟调转头，雄龟则紧追并绕到雌龟的前方。待雌龟不动时，雄龟再绕到雌龟的后面，爬到雌龟的背上，用前肢勾住雌龟的背甲前缘，伸直尾巴将紫黑色的交接器插入雌龟的泄殖腔内。
交配后，雄龟从雌龟身上滑下。四眼斑龟交配多在水的中部或岸边进行。产卵期在5-6月中旬。每次1-2枚并有分批产卵的现象。卵长43mm宽22mm重15克左右。
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